Rosetta(DE3)感受态细胞

目录号
：BL0811

保存条件
：-80℃，干冰运输，避免反复冻融

产品规格
：10×100ul

产品介绍：

本产品是采用进口Rosetta菌株，经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA 的热击转化。Rosetta菌株是携带氯霉素抗性质粒BL21的衍生菌，补充大肠杆菌缺乏的 6种稀有密码子（AUA，AGG
，AGA，CUA，CCC，GGA）对应的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平
。使用pUC19质粒检测，转化效率可 达10^7
。

操作方法：

1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl
，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50 μl感受态细胞为例。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA
，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和）
，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。

3．42℃热击45秒
，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。

4．向每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。

5．根据实验需求

，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上
，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收
，倒置培养

，37℃培养12-16小时。

注意事项:

1）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多
，可取少量转化产物涂布平板
；若转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板
。若预计的克隆数较少

，可通过离心（4,000 rpm，2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存
，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养 基进行培养
。