DH5α感受态细胞

目录号：DH0200

保存条件：-80℃，至少6个月
，干冰运输
，避免反复冻融（冻融之后的感受态不可再保存使用）

产品规格
：10×100ul

产品简介

本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞
，可用于DNA的热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株
，其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补
，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取
。使用pUC19质粒检测
，转化效率可达10^8
，适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制
。

操作方法：

1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100ul，可以根据

实际情况分装使用。以下实验以50ul感受态细胞为例。

2 ．待感受态细胞融化后
，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量

的DNA，通常100ul感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。

3．42℃热击45秒

，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。

4． 向每个离心管中加入450ul无菌 的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃

摇床
，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。

5． 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开
，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时
。

注意：

1）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板
；若转化的DNA总量较少，可取200-300ul转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少， 可通过离心（4000rpm，2分钟）后吸除部分培养液
，悬浮菌体后将其涂布于平板中
。

2）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养


。